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论文解读--海豚链球菌SagH基因DNA疫苗的构建及特性研究

出处:公众号水生动物健康评估 作者:陈国权 祥仔视觉祥仔视觉手机在线视频网 2019-11-06 10:42:00

今天和大家分享一篇来自Fish and Shellfish Immunology的文章:海豚链球菌SagH基因DNA疫苗的构建及特性研究,引用信息如下:
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海豚链球菌是一种危害较大的祥仔视觉祥仔视觉手机在线视频病原菌,链球菌溶血素s是海豚链球菌的一种重要的致病因子。本研究,作者以牙鲆(比目鱼)为研究对象,构建了一种基于链球菌溶血素s相关基因簇SagH基因的DNA疫苗,结果如下:

一、pSagH疫苗在鱼体表达情况

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用pSagH、PCN3或PBS对牙鲆进行了免疫接种。经PCR和RT-PCR检测,pSagH注射鱼的脾、肌肉和肾脏中均检测到质粒DNA和SagH转录物。相比之下,在PCN或PBS接种的鱼类中未检测到SagH转录情况。为了检测SagH蛋白在接种鱼中的表达,作者进行了免疫胶体金电镜分析,结果显示SagH蛋白在接种pSagH的鱼的肌肉组织中产生,而在PCN3的鱼或PBS的鱼中没有产生。

二、pSagH疫苗对头肾巨噬细胞呼吸爆发活性的影响

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呼吸爆发活性表明,与PCN3或PBS免疫组相比,pSagH免疫组的巨噬细胞在接种后第4、7和14天呼吸爆发活性显著增强(p<0.05)。

三、免疫鱼血清抗体的产生

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用pSagH免疫的鱼血清中含有抗该蛋白的抗体。特异性血清抗体与rSagH2(重组SagH2)在2周时出现,并持续至至少8周。此外,最大血清效价在接种后4周时发生。PCN3和PBS免疫的鱼未检测到特异性血清抗体的产生。

四、pSagH疫苗免疫保护率

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接种pSagH的鱼在1~2个月后,用海豚链球菌SF1或29177对其进行感染,并监测15天的死亡率。当在接种后一个月用海豚链球菌SF1感染时,接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为6.0%、76.0%和82.0%。当在接种后两个月用海豚链球菌SF1感染时,接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为8.0%、80.0%和86.0%。在接种一个月后和两个月后,pSagH免疫鱼的相对存活率分别为92.62%和90.58%。为了检验对海豚链球菌29177的交叉保护作用,在接种一个月后用海豚链球菌29177攻击接种过的鱼,结果表明,pSagH、PCN3和PBS接种过的鱼平均累积死亡率分别为12.0%、66.0%和70.0%。在2个月时,接种pSagH、PCN3和PBS的鱼平均累积死亡率分别为14.0%、68.0%和72.0%。因此,在接种1个月和2个月后,接种的用海豚链球菌29177感染接种过pSagH的鱼的相对存活率分别为83.01%和80.65%。

五、免疫基因在鱼体内的表达

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采用qRT-PCR方法检测pSagH诱导的免疫相关基因的表达。与接种PCN3相比,接种pSagH疫苗鱼体白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ),干扰素诱导的Mx蛋白(Mx)、NK细胞增强因子(NKEF)、转化生长因子β(TGFβ)、补体C3、免疫球蛋白M(IgM)、D(IgD)和T(IgT)、组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类α和Ⅱ类α、CD40和CD8α显著(p<0.01或p<0.05)上调。

小结:
用免疫组化方法检测pSagH(DNA疫苗)免疫后鱼组织中SagH的转录和蛋白表达情况。后期的免疫保护作用表明,1个月和2个月接种DNA疫苗的鱼对i型链球菌的相对存活率分别为92.62%和90.58%。此外,接种DNA疫苗后对Ⅱ型链球菌有很强的交叉保护作用,1个月和2个月后的相对存活率分别为83.01%和80.65%。与对照组相比,接种DNA疫苗后的鱼能诱导更强的呼吸爆发活动,特异性抗体效价更高。qPCR结果表明,一些可能参与先天性和适应性免疫应答的免疫基因的表达上调。这些结果表明,pSagH是一种可用于祥仔视觉祥仔视觉手机在线视频中抗牙鲆i型和ii型链球菌感染的候选DNA疫苗。

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